香菇母种繁育技术

将香菇的组织、孢子或菌丝分离、纯化、试管培养，再用于繁殖原种或保藏用菌种，称为母种。但究竟如何呢？有以下几点。

1.菌株分离

1. 组织分离

培育优良菌种，必须有好母种，好母种来源于健康的香菇。因此，必须选择发育正常、个体强壮、无虫咬的新鲜菇芽作为分离材料。菇蕾采收后，无需用水清洗或用水消毒。放入干净的培养皿中，用消毒过的手或手术刀切开香菇，从盖与柄接触的部分切出黄豆大小的香菇肉，放在准备好的培养基上，装满它与棉花。能。

2. 孢子分离

选用成熟度80%的健壮个体香菇，去掉菌柄，将菌鳃向下挂在玻璃漏斗上的特制铁丝钩上，漏斗盖住培养皿（培养皿置于有纱布的搪瓷锅中）静置12-20小时后，鳃上的大部分孢子（种子）会落入培养皿中，形成一层白色粉末，可作为隔离培养物。

接种孢子时，用接种针取出少量孢子，用无菌水配成孢子悬液。然后用接种针取出少量悬液，以划线方式接种到培养皿内的培养基上。孢子萌发形成菌落后，选择孢子萌发和生长最好的菌落进行纯化和转管繁殖。

3. 蘑菇木菌丝的分离

选一小块还没有长出蘑菇或刚长出蘑菇，但菌丝又恢复生长（肉眼看不到细菌）的菇木，未经表面消毒就带回室内。用皮带冲洗要分离的部分，去除树皮，然后用酒精消毒的皮带冲洗，并在酒精灯的火焰上消毒嘴巴。冲孔菇木块中间，剪一块黄豆粒大小，插到介质中。

以上三种分离方法，整个过程应在无菌室内进行，所有用具均应严格消毒，防止被细菌污染。无菌室应事先喷洒5%的石炭酸，有条件时用紫外线照射20-30分钟。接种台上最好铺一块用2%Lysol消毒过的湿纱布。

二、培训

菌体分离接种后，在25左右培养。两三天后，菌肉或木块上可见白色棉状菌丝，三四天后，孢子中长出白色棉状菌丝。菌丝，十多天整个试管都长满了菌丝。在培养过程中，如果试管内的培养基上有蓝色、绿色、黄色或糊状物质，则表示已被细菌污染，不能使用。因此，在分离菌株时，通常应分几管，选择生长最好的作为母种进行纯化或转移。

以上三种分离方法中，常用的是组织分离法，因为无性繁殖变异小，操作简单，不易带入杂菌。在没有香菇的情况下，可以采用菌丝分离法。如果要杂交繁殖，就必须采用孢子分离法，必须挑出单个孢子进行杂交。

3.净化

组织分离不易带入杂菌，但孢子分离往往带入杂菌，必须进行纯化。即从培养基中挑取蘑菇菌丝，放入新的培养基中，连续数次可得到纯蘑菇菌丝。这个过程称为净化。

4. 母种转育

将一个试管的母种分成许多试管进行繁殖，称为转移育种。一管母种可转30管左右。接种量大，菌丝长得快；如果接种量小，菌丝体生长缓慢。方法：用消毒过的接种钩，将一小块母种连同培养基一起放入母种培养基中部，约0.5平方厘米，以利于菌丝的快速繁殖。

整个过程也是无菌进行的。培养温度约为25C。接种一天后，可以看到白色菌丝从接种物中生长出来。十多天后，菌丝长满了整个管子，即可用于插入原种培养基或作为母种保存。

5.母种保护

菌种保存最好用马铃薯、葡萄糖或白糖培养基，不宜用木汁琼脂培养基，后者菌丝生长快，易老化。母种常温下可保存2-3个月（如时间过长，培养基因中的水分蒸发收缩，菌种老化）。如需进一步使用，必须及时转移至管中保存。在高温高湿的雨季和夏季，要特别注意细菌的污染。

在低温下，培养基中的水分蒸发缓慢，同时菌丝体的新陈代谢减慢或停止，菌体的保存时间可以延长。在1-4的冰箱中，细菌可以保存半年左右，但要注意不要让卫生棉条受潮，导致细菌滋生。贮存温度不宜过低，否则斜面培养液冻结脱水，菌种特性易衰退或死亡。

对于长期低温保存的亲本，使用前必须将菌种置于适宜的温度下，使其苏醒后立即使用（菌种放置时间长易腐烂），否则转移管不易存活。为防止菌株因多次转移而发生降解或变异，应在2-3年内重新分离保存。